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本试剂盒可从细菌、酵母、真菌、植物和动物组织中快速提取总RNA。SD-10吸附柱内嵌的吸附膜最多可吸附10μg的RNA，对蛋白、盐离子和其他杂质无吸附性。纯化的RNA可广泛应用于Northern blot、印迹杂交、poly(A)+筛选、体外翻译、RNase保护实验、RT-PCR、实时荧光定量PCR、cDNA文库的构建等。

• 适用范围广；
  
• 操作简单快速，整个过程20分钟左右完成(不包括样品准备时间)；
  
• 得率高；
  
• 无需苯酚/氯仿提取，无需乙醇沉淀。

• RLT Solution在收到货后应置于2～8℃保存及使用。
  
• 使用前，5mL RPE Solution(50T)中应加入20mL无水乙醇，25mL RPE Solution(100T)中应加入100mL无水乙醇。如果由于运输过程泄漏导致RPE Solution体积不足5mL或25mL，则需要重新测量其体积，并确定应该加入多少ml的乙醇(无水乙醇:RPE Solution = 4:1)。

• 样品准备：
  
  • 动物细胞
    
    • 悬浮培养细胞：取约5×10⁶个细胞，1200rpm离心5min收集细胞。在RNA-free的1.5mL离心管中小心移除全部上清(注意：未完全移除的细胞培养基会抑制裂解反应，并且会稀释液，影响SD-10吸附柱对RNA的吸附，导致RNA得率降低)，并加入350μL的RLT Solution，用移液枪吹打混匀。匀浆机匀浆30sec或用20-G(D=0.9mm)针头抽吸5次，然后进行步骤2。
      
    • 贴壁培养细胞：可以通过胰蛋白酶的消化收集细胞后再裂解。吸走培养基，用PBS洗涤细胞。吸走PBS后，再加入含有0.1～0.25%胰蛋白酶的PBS。细胞从培养板或培养瓶上脱落后，将细胞(大约5×10⁶个细胞)转移到一个RNA-free的1.5mL离心管中，1200rpm离心5min，去掉上清。加入350μL的RLT Solution，涡旋振荡(直到无可见的细胞团块)。匀浆机匀浆30sec或用20-G(D=0.9mm)针头抽吸5次，然后进行步骤2。
  • 细菌
    
    • 5000rpm 4℃离心3min收集适当数量的菌体(<1×10⁹)。弃上清，彻底吸净培养基。
      
    • 加入100μL含有溶菌酶TE并涡旋振荡，室温孵育数分钟，间或颠倒混匀。
      注意：革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌需要不同数量的溶菌酶和孵育时间，具体如下表所示：
      

      细菌	TE中溶菌酶的浓度	孵育时间(室温)
      革兰氏阴性	400μg/mL	3-5minutes
      革兰氏阳性	3mg/mL	5-10minutes

    • 加入350μL的RLT Solution，剧烈振荡。如果有可见的不容性物质，10000rpm 2min。上清液转移到RNA-free的1.5mL离心管中，然后进行步骤2。
  • 动物或植物组织，或丝状真菌
    
    • 样品准备：将样品放入研钵中加入液氮研磨成粉末。在液氮挥发完之前将30mg(动物组织)，或100mg(植物组织或丝状真菌)样品转移到一个新的RNA-free 1.5mL离心管中。切勿使样品解冻。直接开始步骤b。
      
    • 加入450μL RLT Solution到离心管中，剧烈振荡混匀，12000rmp离心5min，取上清。56℃温浴有助于裂解组织。对于淀粉含量高的样品，不可温浴以避免淀粉的膨胀。
• 加入1/2体积的乙醇到上述裂解产物中(步骤1)，移液枪吹打以混合均匀。
  注意：加入乙醇会也许会形成沉淀，但这对实验过程无影响。
  
• 将SD-10吸附柱放入2mL收集管中。转移上述乙醇混合液到柱子中。8000rpm离心1min。倒掉收集管中的液体。
  
• 加入500μL RW Solution到SD-10吸附柱，10000rpm离心1min。倒掉收集管中的液体，将SD-10吸附柱放回原来的收集管中。
  
• 加入500μL RPE Solution (使用前确保RPE Solution已加入乙醇)到SD-10吸附柱，10000rpm离心1min。倒掉收集管中的液体，将SD-10吸附柱放回原来的收集管中。
  
• 重复步骤5。
  
• 10000rpm离心2min，以移除残留的RPE Solution。
  
• 将SD-10吸附柱放到一个干净的RNase-free 1.5mL离心管中。加入30～50μL RNase-free的水到吸附膜的中央，50℃温浴2min。10000rpm离心1min。此时RNA可立即使用或者保存于-20℃或-70℃。